دستیابی کی حیثیت: | |
---|---|
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H7/H9/جنرل ذیلی قسم RNA (PCR-Fluorescence Probing) کے لیے ڈیٹیکشن کٹ
【پروڈکٹ کا نام】
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H7/H9/جنرل ذیلی قسم کے لیے ریئل ٹائم PCR ڈیٹیکشن کٹ
【پیکیج】
50 کٹس/باکس
【اہم اجزاء اور مواد】
نام | تفصیلات | مقدار |
H5/H7/H9/General Trivalent Reaction Solution | 1250µl/ٹیوب | 1 |
H5/H7/H9/جنرل مثبت کنٹرول | 250µl/ٹیوب | 1 |
منفی کنٹرول | 250µl/ٹیوب | 1 |
【اسٹوریج اور شیلف لائف】
-20±5℃ پر ذخیرہ کیا گیا، 3 بار منجمد اور پگھلنا ≤ بار بار، شیلف لائف 12 ماہ ہے۔
【ماڈل】
ABI 7500, ABI QuantStudio 5, CFX Connect, CFX Opus 96, LightCycler480, Gentiter 96E/96R, LineGene 9600 Plus اور دیگر فلوروسینٹ مقداری PCR یمپلیفائر۔
【ٹیسٹ کا طریقہ کار】
1. نیوکلک ایسڈ نکالنا
نیوکلک ایسڈ نکالنے کے لیے کمرشلائزڈ آر این اے ایکسٹرکشن کٹ کی جا سکتی ہے، براہ کرم کٹ کی ہدایات پر عمل کریں۔
2. پی سی آر پروردن
2.1 ٹیسٹ کے نمونوں کی تعداد کا حساب لگائیں، n+2 PCR ری ایکشن ٹیوب لیں، اور ہر ٹیوب پر 25µl ری ایکشن سلوشن شامل کریں۔
2.2 5µl شامل کریں۔ منفی کنٹرول کا نیوکلک ایسڈ، مثبت کنٹرول اور نمونے بالترتیب مندرجہ بالا PCR ری ایکشن ٹیوبوں میں، 8000rpm پر کئی سیکنڈ کے لیے سینٹری فیوج کریں، اور انہیں فلوروسینٹ مقداری PCR یمپلیفائر میں ڈالیں۔
2.3 ردعمل کی شرائط درج ذیل ہیں:
یمپلیفائر کے متعلقہ پیرامیٹرز | |||
سسٹم | کل حجم: 30µl | ||
سگنل جمع کرنا
| ایویئن انفلوئنزا H5/H7/H9/جنرل
| H5 ذیلی قسم - HEX چینل فلوروسینس سگنل جمع کرتا ہے۔ | |
H7 ذیلی قسم - FAM چینل فلوروسینس سگنل جمع کرتا ہے۔ | |||
H9 ذیلی قسم - Cy5 چینل فلوروسینس سگنل جمع کرتا ہے۔ | |||
جنرل - ROX چینل فلوروسینس سگنل جمع کرتا ہے۔ | |||
پی سی آر رد عمل کے حالات
| اسٹیج | Condition | سائیکل نمبر |
ریورس ٹرانسکرپشن | 55℃: 15 منٹ | 1 | |
Predegeneration | 95℃: 30 سیکنڈ | 1 | |
پی سی آر
| 95℃: 10 سیکنڈ |
40
| |
56℃: 30 سیکنڈ (اس مرحلے کے اختتام پر فلوروسینٹ سگنل جمع کرنے کے لیے سیٹ کریں) |
【نتائج کی تشریح】
1. ٹیسٹ کٹ کی تاثیر کا تعین:
(1) کمزور مثبت کنٹرول: FAM، HEX، Cy5 اور ROX چینلز کی Ct ویلیو ≤ 32، واضح ایکسپونینشل مرحلے کے ساتھ ایمپلیفیکیشن وکر۔
(2) خالی کنٹرول: FAM، HEX، Cy5 اور ROX چینلز میں کوئی ایمپلیفیکیشن وکر نہیں ہے، یا ایمپلیفیکیشن وکر سیدھا یا ہلکا ترچھا ہے، کوئی اہم ایکسپونیشنل مرحلہ نہیں ہے، اور Ct ویلیو ≥ 38 یا کوئی Ct ویلیو نہیں ہے۔
2. نتائج کا تعین:
نتیجہ کا فیصلہ | ایف اے ایم چینل | ہیکس چینل | Cy5 چینل | ROX چینل |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5 ذیلی قسم نیوکلک ایسڈ مثبت | - | + | - | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H7 ذیلی قسم نیوکلک ایسڈ مثبت | + | - | - | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H9 ذیلی قسم نیوکلک ایسڈ مثبت | - | - | + | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H7 نیوکلک سب ٹائپ ایسڈ پازیٹو | + | + | - | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H9 نیوکلک سب ٹائپ ایسڈ پازیٹو | - | + | + | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H7/H9 نیوکلک سب ٹائپ ایسڈ پازیٹو | + | - | + | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H7/H9 نیوکلک سب ٹائپ ایسڈ مثبت | + | + | + | + |
کم پیتھوجینک ایویئن انفلوئنزا وائرس نیوکلک ایسڈ مثبت | - | - | - | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس نیوکلک ایسڈ منفی | - | - | - | - |
*نوٹ:
(1) اگر لوگاریتھمک گروتھ فیز ایمپلیفیکیشن وکر اور Ct ویلیو ≤ 36 ہے تو اسے + کے طور پر سمجھا جاتا ہے۔اگر کوئی ایمپلیفیکیشن وکر یا Ct قدر> 36 نہیں ہے، تو اس کا فیصلہ - کے طور پر کیا جائے گا۔نمونے مشتبہ ہیں جب 36 <Ct قدر <40، جس کی دوبارہ جانچ کرنی ہوگی۔
(2) اگر کسی بھی H5/H7/H9 ذیلی قسم کے نتائج + ROX چینل کے ساتھ ہیں - تو اسے دوبارہ ٹیسٹ کرنا ہوگا۔
【احتیاطی تدابیر】
1. لیبارٹری کا انتظام پی سی آر جین ایمپلیفیکیشن لیبارٹری کے انتظامی تصریحات کے مطابق سختی سے ہوگا۔لیبارٹری کے اہلکاروں کو پیشہ ورانہ تربیت دی جانی چاہیے۔تجرباتی عمل کو مختلف علاقوں میں سختی سے انجام دیا جائے گا (ریجنٹ کی تیاری کا علاقہ، نمونہ کی تیاری کا علاقہ، امپلیفیکیشن اور مصنوعات کے تجزیہ کا علاقہ)۔تمام استعمال کی اشیاء کو جراثیم کشی کے بعد ڈسپوزایبل کیا جائے گا۔تجرباتی آپریشن کے ہر مرحلے پر خصوصی آلات، سازوسامان اور سامان کو ایک دوسرے سے استعمال نہیں کیا جائے گا۔
2. براہ کرم ری ایجنٹ اور نمونہ کی تیاری کے مرحلے کے لیے حیاتیاتی حفاظتی کابینہ تیار کریں۔تجربہ کے دوران لیب کوٹ، ڈسپوزایبل دستانے اور پائپٹر لگائے جائیں گے۔
3. جہاں تک ممکن ہو ری ایجنٹس کے بار بار جمنے اور پگھلنے سے گریز کیا جائے۔استعمال کرنے سے پہلے، ری ایجنٹس کو مکمل طور پر پگھلا کر 8000rpm پر کئی سیکنڈ تک سینٹری فیوج کیا جانا چاہیے۔
4. براہ کرم نمونہ کی تیاری کے علاقے میں استعمال ہونے والے پپیٹ کو جراثیم کشی والے کنٹینر میں ڈالیں اور جراثیم کشی کے بعد فضلے کے ساتھ پھینک دیں۔
5. تجربے کے بعد، ورک ٹیبل اور پائپٹر کا علاج 10% ہائپوکلورائٹ یا 75% الکحل یا الٹرا وائلٹ لیمپ سے کیا گیا۔
【تیار】
نام: شانڈونگ زنڈا جین ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ
Shandong Sinder Technology Co., Ltd کا ذیلی ادارہ
پتہ: بلڈنگ B2، بنداوہیگو انڈسٹریل پارک، شونگینگ روڈ، زوچینگ سٹی، شان ڈونگ صوبہ
پوسٹ کوڈ: 262233
فون: +86 - 0532 5882 0810
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H7/H9/جنرل ذیلی قسم RNA (PCR-Fluorescence Probing) کے لیے ڈیٹیکشن کٹ
【پروڈکٹ کا نام】
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H7/H9/جنرل ذیلی قسم کے لیے ریئل ٹائم PCR ڈیٹیکشن کٹ
【پیکیج】
50 کٹس/باکس
【اہم اجزاء اور مواد】
نام | تفصیلات | مقدار |
H5/H7/H9/General Trivalent Reaction Solution | 1250µl/ٹیوب | 1 |
H5/H7/H9/جنرل مثبت کنٹرول | 250µl/ٹیوب | 1 |
منفی کنٹرول | 250µl/ٹیوب | 1 |
【اسٹوریج اور شیلف لائف】
-20±5℃ پر ذخیرہ کیا گیا، 3 بار منجمد اور پگھلنا ≤ بار بار، شیلف لائف 12 ماہ ہے۔
【ماڈل】
ABI 7500, ABI QuantStudio 5, CFX Connect, CFX Opus 96, LightCycler480, Gentiter 96E/96R, LineGene 9600 Plus اور دیگر فلوروسینٹ مقداری PCR یمپلیفائر۔
【ٹیسٹ کا طریقہ کار】
1. نیوکلک ایسڈ نکالنا
نیوکلک ایسڈ نکالنے کے لیے کمرشلائزڈ آر این اے ایکسٹرکشن کٹ کی جا سکتی ہے، براہ کرم کٹ کی ہدایات پر عمل کریں۔
2. پی سی آر پروردن
2.1 ٹیسٹ کے نمونوں کی تعداد کا حساب لگائیں، n+2 PCR ری ایکشن ٹیوب لیں، اور ہر ٹیوب پر 25µl ری ایکشن سلوشن شامل کریں۔
2.2 5µl شامل کریں۔ منفی کنٹرول کا نیوکلک ایسڈ، مثبت کنٹرول اور نمونے بالترتیب مندرجہ بالا PCR ری ایکشن ٹیوبوں میں، 8000rpm پر کئی سیکنڈ کے لیے سینٹری فیوج کریں، اور انہیں فلوروسینٹ مقداری PCR یمپلیفائر میں ڈالیں۔
2.3 ردعمل کی شرائط درج ذیل ہیں:
یمپلیفائر کے متعلقہ پیرامیٹرز | |||
سسٹم | کل حجم: 30µl | ||
سگنل جمع کرنا
| ایویئن انفلوئنزا H5/H7/H9/جنرل
| H5 ذیلی قسم - HEX چینل فلوروسینس سگنل جمع کرتا ہے۔ | |
H7 ذیلی قسم - FAM چینل فلوروسینس سگنل جمع کرتا ہے۔ | |||
H9 ذیلی قسم - Cy5 چینل فلوروسینس سگنل جمع کرتا ہے۔ | |||
جنرل - ROX چینل فلوروسینس سگنل جمع کرتا ہے۔ | |||
پی سی آر رد عمل کے حالات
| اسٹیج | Condition | سائیکل نمبر |
ریورس ٹرانسکرپشن | 55℃: 15 منٹ | 1 | |
Predegeneration | 95℃: 30 سیکنڈ | 1 | |
پی سی آر
| 95℃: 10 سیکنڈ |
40
| |
56℃: 30 سیکنڈ (اس مرحلے کے اختتام پر فلوروسینٹ سگنل جمع کرنے کے لیے سیٹ کریں) |
【نتائج کی تشریح】
1. ٹیسٹ کٹ کی تاثیر کا تعین:
(1) کمزور مثبت کنٹرول: FAM، HEX، Cy5 اور ROX چینلز کی Ct ویلیو ≤ 32، واضح ایکسپونینشل مرحلے کے ساتھ ایمپلیفیکیشن وکر۔
(2) خالی کنٹرول: FAM، HEX، Cy5 اور ROX چینلز میں کوئی ایمپلیفیکیشن وکر نہیں ہے، یا ایمپلیفیکیشن وکر سیدھا یا ہلکا ترچھا ہے، کوئی اہم ایکسپونیشنل مرحلہ نہیں ہے، اور Ct ویلیو ≥ 38 یا کوئی Ct ویلیو نہیں ہے۔
2. نتائج کا تعین:
نتیجہ کا فیصلہ | ایف اے ایم چینل | ہیکس چینل | Cy5 چینل | ROX چینل |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5 ذیلی قسم نیوکلک ایسڈ مثبت | - | + | - | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H7 ذیلی قسم نیوکلک ایسڈ مثبت | + | - | - | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H9 ذیلی قسم نیوکلک ایسڈ مثبت | - | - | + | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H7 نیوکلک سب ٹائپ ایسڈ پازیٹو | + | + | - | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H9 نیوکلک سب ٹائپ ایسڈ پازیٹو | - | + | + | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H7/H9 نیوکلک سب ٹائپ ایسڈ پازیٹو | + | - | + | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس H5/H7/H9 نیوکلک سب ٹائپ ایسڈ مثبت | + | + | + | + |
کم پیتھوجینک ایویئن انفلوئنزا وائرس نیوکلک ایسڈ مثبت | - | - | - | + |
ایویئن انفلوئنزا وائرس نیوکلک ایسڈ منفی | - | - | - | - |
*نوٹ:
(1) اگر لوگاریتھمک گروتھ فیز ایمپلیفیکیشن وکر اور Ct ویلیو ≤ 36 ہے تو اسے + کے طور پر سمجھا جاتا ہے۔اگر کوئی ایمپلیفیکیشن وکر یا Ct قدر> 36 نہیں ہے، تو اس کا فیصلہ - کے طور پر کیا جائے گا۔نمونے مشتبہ ہیں جب 36 <Ct قدر <40، جس کی دوبارہ جانچ کرنی ہوگی۔
(2) اگر کسی بھی H5/H7/H9 ذیلی قسم کے نتائج + ROX چینل کے ساتھ ہیں - تو اسے دوبارہ ٹیسٹ کرنا ہوگا۔
【احتیاطی تدابیر】
1. لیبارٹری کا انتظام پی سی آر جین ایمپلیفیکیشن لیبارٹری کے انتظامی تصریحات کے مطابق سختی سے ہوگا۔لیبارٹری کے اہلکاروں کو پیشہ ورانہ تربیت دی جانی چاہیے۔تجرباتی عمل کو مختلف علاقوں میں سختی سے انجام دیا جائے گا (ریجنٹ کی تیاری کا علاقہ، نمونہ کی تیاری کا علاقہ، امپلیفیکیشن اور مصنوعات کے تجزیہ کا علاقہ)۔تمام استعمال کی اشیاء کو جراثیم کشی کے بعد ڈسپوزایبل کیا جائے گا۔تجرباتی آپریشن کے ہر مرحلے پر خصوصی آلات، سازوسامان اور سامان کو ایک دوسرے سے استعمال نہیں کیا جائے گا۔
2. براہ کرم ری ایجنٹ اور نمونہ کی تیاری کے مرحلے کے لیے حیاتیاتی حفاظتی کابینہ تیار کریں۔تجربہ کے دوران لیب کوٹ، ڈسپوزایبل دستانے اور پائپٹر لگائے جائیں گے۔
3. جہاں تک ممکن ہو ری ایجنٹس کے بار بار جمنے اور پگھلنے سے گریز کیا جائے۔استعمال کرنے سے پہلے، ری ایجنٹس کو مکمل طور پر پگھلا کر 8000rpm پر کئی سیکنڈ تک سینٹری فیوج کیا جانا چاہیے۔
4. براہ کرم نمونہ کی تیاری کے علاقے میں استعمال ہونے والے پپیٹ کو جراثیم کشی والے کنٹینر میں ڈالیں اور جراثیم کشی کے بعد فضلے کے ساتھ پھینک دیں۔
5. تجربے کے بعد، ورک ٹیبل اور پائپٹر کا علاج 10% ہائپوکلورائٹ یا 75% الکحل یا الٹرا وائلٹ لیمپ سے کیا گیا۔
【تیار】
نام: شانڈونگ زنڈا جین ٹیکنالوجی کمپنی لمیٹڈ
Shandong Sinder Technology Co., Ltd کا ذیلی ادارہ
پتہ: بلڈنگ B2، بنداوہیگو انڈسٹریل پارک، شونگینگ روڈ، زوچینگ سٹی، شان ڈونگ صوبہ
پوسٹ کوڈ: 262233
فون: +86 - 0532 5882 0810